應使用經過校準的洗板設備
自動洗板機比手動洗板更具重復性,但需定期檢查噴嘴是否堵塞、吸液是否徹底,并校準洗液分配量。建議每次實驗前進行空板測試,確認各孔洗液體積均勻,避免因設備誤差導致局部清洗不充分。
洗液配制需精確統一
緩沖液的pH值、離子強度及表面活性劑濃度都會影響洗滌效果。建議使用現配洗液,若需保存,應標注配制時間并避免反復凍融。同時,洗液溫度需與實驗環境平衡,過冷或過熱可能導致蛋白非特異性結合。
洗滌次數和時間也需嚴格把控
通常推薦3-5次洗滌,每次浸泡時間10-30秒,但需根據具體試劑盒要求調整。過度洗滌可能造成包被抗原脫落,而洗滌不足則易殘留未結合物質。可通過預實驗優化條件,并在標準操作程序(SOP)中明確記錄參數。
板孔邊緣效應需特別注意
洗板時邊緣孔易因表面張力導致液體殘留,可適當增加邊緣孔的洗滌次數,或在吸液時傾斜板條確保液體完全移除。實驗過程中還應避免板條長時間暴露于空氣中,防止干燥導致背景升高。
建議引入陰性對照和空白對照監控洗滌效果
若對照孔顯色異常,可能提示洗滌不徹底或洗液污染。定期培訓操作人員,并通過重復性實驗評估批次間差異,進一步優化流程。